Revista de Catálisis Molecular B: Enzimática
Volumen 111, enero de 2015, páginas 36-42
Modificación dirigida al sitio de Proteus sp. variantes de lipasa K107 con un derivado de polietilenglicol
Aspectos destacados
â¢Presentamos un método novedoso para la PEGilación de proteínas dirigida al sitio.
â¢Se funcionalizaron mPEG lineales de varios tamaños mediante dopamina.
Se utilizaron derivados de PEG para la PEGilación específica de sitio de una enzima con un único residuo Cys.
â¢Las enzimas pegiladas mantuvieron sus estructuras y actividades secundarias, que fueron mayores en los conjugados de PEG de baja masa molecular.
â¢Los conjugados con el sitio de acoplamiento del polímero cerca del centro catalítico eran más estables.
Resumen
La unión covalente de PEG a proteínas diana, conocida como PEGilación, tiene amplias aplicaciones biomédicas y biotecnológicas. En particular, la PEGilación específica de sitio se usa ampliamente debido a sus propiedades únicas de preservar la bioactividad, mejorar la estabilidad de las proteínas conjugadas y lograr un alto grado de homogeneidad. En este trabajo, se funcionalizaron mPEG lineales de varios tamaños (PM = 5, 12 y 20 kDa) mediante dopamina y se utilizaron para la PEGilación específica de sitio de Proteus sp. derivados de lipasa K107 con un único residuo Cys introducido mediante mutagénesis dirigida al sitio en la superficie de la proteína accesible al disolvente. La especificidad de la conjugación se verificó mediante espectrometría de masas SDS-PAGE y MALDI-TOF, y las estructuras secundarias de los conjugados se verificaron mediante dicroísmo circular. Las enzimas pegiladas conservaron su actividad, que fue mayor en los conjugados de PEG de bajo peso molecular. Es importante destacar que tanto el pH como la estabilidad térmica de las enzimas mejoraron mediante la PEGilación, especialmente a pH básico y por encima de la temperatura ambiente. Además, los conjugados con el sitio de acoplamiento del polímero cerca del centro catalítico fueron más estables. Estos resultados demuestran un método novedoso y eficaz de modificación de proteínas de sitio específico mediante PEG funcionalizado con catecol que podría aplicarse potencialmente a otras enzimas.
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