J Biotecnología. 31 de diciembre de 2012; 162 (2-3): 283-8. doi: 10.1016/j.jbiotec.2012.09.008. Publicación electrónica del 20 de septiembre de 2012.
Preparación, análisis estructural y bioactividad del conjugado de ribonucleasa A-albúmina: tetraconjugación o PEG como conector
Resumen
La Ribonucleasa A (RNasa A) es una enzima terapéutica con acción citotóxica contra las células tumorales. Su aplicación clínica está limitada por la corta vida media y la estabilidad insuficiente. La conjugación de albúmina puede superar la limitación, al tiempo que disminuye drásticamente la actividad enzimática de la ARNasa A. Aquí, se propusieron tres estrategias para preparar los conjugados de ARNasa A-albúmina sérica bovina (BSA). Se prepararon R-SMCC-B (un conjugado de cuatro ARNasa A unidas con una BSA) y R-PEG-B (un monoconjugado) usando Sulfo-SMCC (un conector bifuncional corto) y mal-PEG-NHS (un conector bifuncional). PEG), respectivamente. Se utilizaron Mal-PEG-NHS y hexadecilamina (HDA) para preparar el monoconjugado, R-HDA-B, donde se adoptó HDA para unirse a BSA. El conector PEG puede alargar la proximidad entre la RNasa A y la BSA. Por el contrario, cuatro RNasa A estaban ubicadas estrechamente en BSA en R-SMCC-B. R-SMCC-B mostró la K(m) más baja y la actividad enzimática relativa más alta y k(cat)/K(m) en los tres conjugados. Presumiblemente, la interacción tetravalente de la RNasa A en R-SMCC-B puede aumentar la afinidad de unión a su sustrato. Además, la liberación lenta de BSA de R-HDA-B puede aumentar la actividad enzimática de R-HDA-B. Se espera que nuestro estudio proporcione estrategias para desarrollar un conjugado proteína-albúmina con un alto potencial terapéutico.
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