J Pharm Sci. Febrero de 2020;109(2):981-991. doi: 10.1016/j.xphs.2019.10.052. Publicación electrónica, 2 de noviembre de 2019. Conjugación de poliésteres funcionalizados con amina con dimetilcaseína mediante transglutaminasa microbiana Abstracto Los conjugados proteína-polímero se han utilizado como agentes terapéuticos debido a que exhiben frecuentemente mayor estabilidad, vida media in vivo prolongada y menor inmunogenicidad en comparación con las proteínas nativas. La primera parte de este informe describe la síntesis enzimática de poli(adipato de glicerol) (PGA(M)) por transesterificación entre glicerol y adipato de dimetilo usando lipasa B de Candida antarctica. PGA(M) es un poliéster hidrofílico, biodegradable pero insoluble en agua. Por acilación, PGA(M) se modifica con ácido 6-(Fmoc-amino)hexanoico y con cadenas laterales hidrofílicas de poli(etilenglicol) (mPEG12) haciendo que el polímero sea altamente soluble en agua. A esto le sigue la eliminación de grupos protectores, fluorenilmetiloxicarbonilo, para generar poliéster con grupos amina primarios, a saber, PGA(M)-g-NH2-g-mPEG12. Se han utilizado espectroscopia de RMN de 1H, espectroscopia FTIR y cromatografía de permeación en gel para determinar la estructura química y el índice de polidispersidad de PGA(M) antes y después de la modificación. En la segunda parte, se analiza la conjugación, mediada por transglutaminasa microbiana, de la proteína modelo dimetilcaseína con PGA(M)-g-NH₂-g-mPEG₁ en condiciones de reacción suaves. La SDS-PAGE demuestra la conjugación proteína-poliéster. Palabras clave: CAL-B; poliéster funcionalizado con amina; polimerización enzimática; transglutaminasa microbiana (mTGasa); poli(adipato de glicerol) (M); conjugado proteína-polímero.

Bioconjug Chem. 19 de febrero de 2025;36(2):179-189. doi: 10.1021/acs.bioconjchem.4c00392. Publicación electrónica 20 de enero de 2025. La PEGilación del enlace dipeptídico mejora el índice terapéutico y la farmacocinética de los conjugados anticuerpo-fármaco. Abstracto Las cargas hidrofóbicas incorporadas a los conjugados anticuerpo-fármaco (ADC) suelen ser superiores a las hidrofílicas en cuanto a penetración tumoral y eliminación de microorganismos transeúntes tras su liberación. Sin embargo, son propensas a la agregación y a una depuración plasmática acelerada, lo que conlleva una menor eficacia y un aumento de la toxicidad de las moléculas de ADC. Proteger la hidrofobicidad de las cargas mediante la incorporación de elementos de polietilenglicol (PEG) o grupos azúcar en los enlaces de ADC se ha convertido en una alternativa viable a la adopción directa de cargas hidrofílicas. En este estudio, se sintetizaron enlaces de ADC que incorporaban PEG o grupos azúcar mediante la modificación de enlaces dipeptídicos, siendo la monometil auristatina E (MMAE) hidrofóbica un ejemplo de carga hidrofóbica. Todos los enlazadores de fármacos (DL) se conjugaron con RS7, un anticuerpo humanizado dirigido contra Trop-2, con valores de relación fármaco-anticuerpo (DAR) de 4 u 8. Entre estos, la molécula de ADC RS7-DL 11, con una fracción metil-PEG24 (mPEG24) como cadena lateral del enlazador valina-lisina-PAB (VK), demostró máxima hidrofilicidad, estabilidad biofísica y supresión tumoral, además de una vida media prolongada y una mejor tolerabilidad en animales. En conclusión, mediante la pegilación del enlazador dipeptídico tradicional, hemos demostrado una tecnología optimizada de conjugación de ADC que puede emplearse para conjugar cargas ultrahidrofóbicas, mejorando así tanto el índice terapéutico como el perfil farmacocinético.

Langmuir. 1 de julio de 2014;30(25):7465-74. doi: 10.1021/la500403v. Publicación electrónica 17 de junio de 2014. Efecto de los espaciadores de polietilenglicol, alquilo y oligonucleótidos en la unión, la estructura secundaria y el autoensamblaje de los aptámeros-anfifilos FKN-S2 que se unen a la fractalquina Abstracto Previamente identificamos un aptámero, llamado FKN-S2, que se une a la proteína de superficie celular fractalquina con alta afinidad y especificidad. En este artículo se añadió una cola dialquil C16 hidrofóbica al aptámero para crear un aptámero-anfifílico. Investigamos cómo la cola y una molécula espaciadora de longitud e hidrofobicidad variables, insertada entre la cola y el grupo de cabeza del aptámero, afectan la unión, la estructura y las propiedades de autoensamblaje del aptámero-anfifílico. Sintetizamos aptámeros-anfifílicos sin espaciador (NoSPR), polietilenglicol (PEG4, PEG8, PEG24), alquilo (C12 y C24) u oligonucleótidos (T10 y T5: 10 y 5 timina, y A10: 10 adenina). La adición de la cola redujo la afinidad de unión del aptámero-anfifílico más de 7,5 veces en comparación con el aptámero libre. Los espaciadores de alquilo hidrofóbicos resultaron en la mayor pérdida de afinidad, y los espaciadores de PEG hidrofílicos mejoraron la afinidad anfifílica pero no la restauraron a la del aptámero libre. Curiosamente, los espaciadores de oligonucleótidos produjeron los anfifilos de mayor afinidad. Sin embargo, la composición de nucleótidos no afectó la afinidad, ya que los espaciadores T10 y A10 tuvieron la misma afinidad. Los anfifilos del espaciador de oligonucleótidos tuvieron la mayor afinidad porque el espaciador de oligonucleótidos aumentó la afinidad del aptámero libre; el aptámero FKN-S2 más el espaciador de oligonucleótidos tuvo una mayor afinidad que el aptámero FKN-S2 libre. La espectroscopia de dicroísmo circular (CD) y los estudios de fusión térmica indicaron que el aptámero forma un tallo-bucle y un G-cuadrúplex intramolecular, y la cola estabilizó fuertemente la formación del G-cuadrúplex en un tampón. La microscopía electrónica de transmisión criogénica (crio-TEM) mostró que los aptámeros-anfífilos, independientemente del espaciador utilizado, se autoensamblaban en micelas y nanocintas, estructuras bicapa planas que a menudo presentaban torsión. Finalmente, los liposomas funcionalizados con el anfífilo FKN-S2 se incubaron con células que expresaban fractalquinas, y el grado de unión dependió de la concentración del anfífilo en la superficie del liposoma.

Biosens Bioelectron. 15 de septiembre de 2019:141:111477. doi: 10.1016/j.bios.2019.111477. Publicación electrónica, 25 de junio de 2019. Nueva molécula de enlace de PEG tiolado para el desarrollo de biosensores en superficies de oro Abstracto Las moléculas de enlace modificadoras de superficie pueden influir directamente en el rendimiento y la longevidad de los biosensores. Deben permitir la adhesión de la capa de reconocimiento biológico a la superficie del sensor, así como la protección de la superficie contra la incrustación. Los avances recientes en este campo identificaron varios factores clave que pueden aumentar la eficiencia, la estabilidad y el efecto antiincrustante de una capa formada por moléculas de enlace modificadoras de superficie. En este trabajo se presenta un procedimiento sintético simple, la caracterización y la aplicación de una nueva molécula modificadora de superficie de PEG tiolado (DSPEG2) que podría actuar como un enlace multipropósito para superficies de oro. Los análisis de la distribución espacial molecular de DSPEG2 en superficies de oro se realizaron mediante espectrometría de masas de iones secundarios de tiempo de vuelo (TOF-SIMS) y espectroscopia fotoeléctrica de rayos X (XPS). La inmovilización de DSPEG2 en superficies de oro se examinó mediante voltamperometría cíclica (CV), espectroscopia de impedancia electroquímica (EIS) y resonancia plasmónica superficial (SPR). Nuestros resultados preliminares demostraron que DSPEG2 es una nueva molécula de enlace prometedora que puede aplicarse en una amplia gama de biosensores basados en superficies de oro. Palabras clave: Antiincrustante; Biosensor; Voltamperometría cíclica; Espectroscopía de impedancia electroquímica; Adsorción no específica; PEG; Resonancia plasmónica superficial; Enlace sintético.

H. J. Haematol. Mayo de 2020; 189(3):442-451. doi: 10.1111/bjh.16254. Publicación electrónica del 27 de diciembre de 2019. Los pacientes con leucemia linfoblástica aguda tratados con PEGasparaginasa desarrollan anticuerpos contra el PEG y el enlazador succinato. Abstracto La asparaginasa conjugada con polietilenglicol (PEG) (PEGasparaginasa) es esencial para el tratamiento de la leucemia linfoblástica aguda pediátrica. Desarrollamos un ensayo que identifica anticuerpos contra la fracción PEG, el ligador y el propio fármaco en pacientes con reacciones de hipersensibilidad a la PEGasparaginasa. Se incluyeron dieciocho pacientes tratados según el protocolo DCOG ALL-11, con una reacción de hipersensibilidad neutralizante a la PEGasparaginasa tras las primeras dosis de esta en la inducción (12 pacientes) o durante la intensificación tras una interrupción de varios meses (6 pacientes). Se utilizó ELISA para medir los anticuerpos, recubriendo el ligador succinimidil succinato conjugado con BSA, PEGfilgrastim y asparaginasa de Escherichia coli, y utilizando PEGasparaginasa hidrolizada y mPEG5,000 para la competencia. Se detectaron anticuerpos anti-PEG en todos los pacientes (IgG 100%; IgM 67%), de los cuales el 39% tenía anticuerpos anti-PEG exclusivamente. También se detectaron anticuerpos anti-PEG preexistentes en pacientes que no habían recibido previamente un tratamiento pegilado (58% IgG; 21% IgM). Los anticuerpos contra el ligador SS se detectaron predominantemente durante la inducción (50% IgG; 42% IgM). Los anticuerpos anti-asparaginasa se detectaron solo en el 11% durante la inducción, pero en el 94% durante la intensificación. En conclusión, los anticuerpos anti-PEG y anti-ligador SS desempeñan un papel predominantemente en la respuesta inmunogénica a la pegasparaginasa durante la inducción. Por lo tanto, el cambio a la asparaginasa nativa de E. coli sería una opción para un tratamiento adecuado con asparaginasa. Palabras clave: PEGasparaginasa; leucemia linfoblástica aguda; anticuerpos.

Revista Nanomedicina (Londres). Abril de 2016;11(7):851-65. doi: 10.2217/nnm.16.28. Funcionalización de la superficie de nanopartículas de oro: monocapa mixta versus enlazador peg heterobifuncional Abstracto Para crear un tratamiento clínicamente relevante con nanopartículas de oro (AuNP), la superficie debe funcionalizarse con múltiples ligandos, como fármacos, agentes antiincrustantes y grupos diana. Sin embargo, la unión de varios ligandos de diferentes químicas y longitudes, garantizando al mismo tiempo que todos conserven su funcionalidad biológica, sigue siendo un desafío. Esta revisión compara los dos métodos más utilizados de cofuncionalización de superficies: monocapas mixtas y enlazadores heterobifuncionales. Si bien existen numerosos estudios in vitro que utilizan con éxito ambas disposiciones de superficie, existe poco consenso sobre sus ventajas relativas. Estudios preclínicos y en animales han demostrado la eficacia de la funcionalización con monocapas mixtas y, si bien se han reportado algunos resultados in vitro prometedores para AuNPs con encapsulado de enlace PEG, aún no se comprenden completamente los posibles beneficios de este enfoque.

Int J Nanomedicina. 2023 30 de marzo: 18: 1615-1630. doi: 10.2147/IJN.S402418. Colección electrónica 2023. Efectos de la longitud de la cadena de enlace PEG de las formulaciones liposomales ligadas a folato sobre la capacidad de focalización y la actividad antitumoral del fármaco encapsulado Abstracto Introducción: Los liposomas conjugados con ligando son prometedores para el tratamiento de cánceres con sobreexpresión de receptores específicos. Sin embargo, estudios previos han mostrado resultados inconsistentes debido a las propiedades variables del ligando, la presencia de un recubrimiento de polietilenglicol (PEG) en el liposoma, la longitud del ligador y la densidad del ligando. Métodos: Aquí, preparamos liposomas PEGilados utilizando enlaces PEG de varias longitudes conjugados con folato y evaluamos el efecto de la longitud del enlace PEG en la distribución de nanopartículas y la eficacia farmacológica del fármaco encapsulado tanto in vitro como in vivo. Resultados: Al conjugar folato con la superficie del liposoma, la eficiencia de captación celular en células KB con sobreexpresión del receptor de folato aumentó drásticamente en comparación con la del liposoma normal. Sin embargo, al comparar el efecto de la longitud del ligador de PEG in vitro, no se observaron diferencias significativas entre las formulaciones. Por el contrario, el nivel de acumulación tumoral de partículas in vivo aumentó significativamente al aumentar la longitud del ligador de PEG. El tamaño del tumor se redujo en más del 40 % en el grupo tratado con Dox/FL-10K en comparación con los grupos tratados con Dox/FL-2K o 5K. Discusión: Nuestro estudio sugiere que a medida que aumenta la longitud del enlace PEG, se puede mejorar la capacidad de atacar tumores en condiciones in vivo, lo que puede conducir a un aumento de la actividad antitumoral del fármaco encapsulado. Palabras clave: Longitud del enlazador PEG; liposoma PEGilado; receptor de folato; liposoma conjugado con ligando.

Revisa Zhejiang Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. 25 de abril de 2022;51(2):185-191. doi: 10.3724/zdxbyxb-2022-0047. Avances en la investigación sobre sistemas de administración de nanopartículas lipídicas a ARNm y su aplicación en la terapia con células CAR-T Abstracto La terapia con células T CAR ha demostrado una eficacia significativa en neoplasias hematológicas; sin embargo, requiere mayor optimización. Recientemente, el sistema de administración de nanopartículas lipídicas (LNP)-ARNm como vector de transferencia génica no viral ha avanzado rápidamente en la terapia con células T CAR. El ARNm de claudina-6 (CLDN6) se administra a las células presentadoras de antígenos (CPA) a través del sistema LNP, lo que mejora la función de las células T CAR CLDN6 para la eliminación de células tumorales sólidas. Para el tratamiento de la lesión cardíaca aguda, el ARNm de la proteína activadora de fibroblastos (FAP) CAR se puede administrar a las células T a través del sistema LNP para la producción in vivo de células T CAR FAP, bloqueando así el proceso de fibrosis miocárdica. El sistema de administración de LNP-ARNm presenta ventajas como la ausencia de integración en el genoma del huésped, su bajo costo, baja toxicidad y modificabilidad; por otro lado, presenta ciertas desventajas, como la persistencia celular limitada causada por la expresión transitoria de proteínas y las limitaciones en las técnicas de preparación. Este artículo revisa el avance de la investigación en el sistema de administración in vivo de LNP-ARNm y su aplicación en la terapia con células CAR-T. Palabras clave: Receptor de antígeno quimérico de células T; Vector de transferencia genética; Nanopartícula lipídica; ARN mensajero; Revisión; sistema de administración. Para obtener más información sobre el producto, contáctenos en: EE. UU. Tel: 1-844-782-5734 EE. UU. Tel: 1-844-QUAL-PEG Teléfono de CHN: 400-918-9898 Correo electrónico: sales@sinopeg.com